本产品是根据探针法荧光定量PCR原理研发的检测试剂盒,具备以下显著特点:
产品特点
尊龙凯时的此款检测试剂盒即开即用,用户仅需提供样品DNA模板,便可快速展开实验。同时,引物及其他组分经过优化,有效提升灵敏度,确保检测试验的可靠性。
该试剂盒还提供阳性对照,以便于明确区分假阴性样品,增强实验的准确性。而引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区,保证了高特异性,有效避免与其他生物样本的DNA发生交叉反应。
此外,尊龙凯时的检测试剂盒既可用于定性检测,也适用于定量检测。在进行定量检测时,线性范围至少为5个数量级,满足多种检测需求。每套试剂盒可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应,实用性极高。
该产品仅适用于科研用途,使用方法如下:
使用方法
一、DNA提取(样本制备区)
请使用自选方法提取并纯化样品DNA,本试剂盒与大多数市场上的核酸提取试剂盒兼容。
二、稀释标准曲线样品(样本制备区)
由于阳性对照浓度较高,请在独立区域内进行稀释操作,以避免样品或试剂盒其他成分的污染。首先标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。接着,用带芯枪头加入45μL DEPC-H2O。然后在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL阳性对照,充分震荡1分钟,得到1×107拷贝/μL的标准曲线样品,放在冰上待用。依此类推,稀释获得其他的标准曲线样品。
三、试剂配制(试剂准备区)
准备N+2个qPCR管(N个待测样品+1个阴性对照+6个阳性对照),向各PCR管中分别加入所需成分(具体见详细说明书)。然后将其转移至样本准备区。
四、添加模板(模板添加区)
向qPCR管中分别加入2μL模板,加入顺序为阴性对照(DEPC-H2O)、待测样品模板、婴儿利什曼虫qPCR阳性对照,离心30秒后,立即进行扩增反应。
五、扩增反应(扩增及产物分析区)
将PCR管放置在PCR扩增仪器样品槽的相应位置,进行扩增,扩增程序已详细记载于说明书中。
六、结果分析
如果制作标准曲线,以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴绘制标准曲线,再根据待测样品的Ct值推算样品DNA浓度的log值。如果未制作标准曲线,则根据以下标准进行结果判定:阳性对照的Ct值应小于30并呈现明显的指数增长,而阴性对照的Ct值应为38或无Ct值,样品的检测结果可通过Ct值范围进行判断。
运输及保存
此款试剂盒应低温运输,建议在-20℃下保存,保存期限为一年。阳性对照须单独存放,避免污染其他试剂。